發(fā)酵罐菌種實(shí)驗(yàn)室種子制備
發(fā)布時(shí)間：2013-11-13 8:32
實(shí)驗(yàn)室種子制備包括瓊脂斜面培養(yǎng)、固體培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)和搖瓶液體培養(yǎng)等，目的是為種子罐提供種子。
保藏在砂土管或冷凍干燥管中的菌體在無(wú)菌條件下接入適合于孢子萌發(fā)或菌絲生長(zhǎng)的斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)，成熟后可挑選正常的孢子再一次接入試管斜面。根據(jù)菌種的生理生長(zhǎng)特性不同，提供給種子罐的菌種狀態(tài)也不同，分為：
①對(duì)于產(chǎn)孢子能力強(qiáng)或孢子發(fā)芽、生長(zhǎng)繁殖快的菌種，可采用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)孢子，孢子可直接作為種子罐的種子。如青霉素產(chǎn)生菌產(chǎn)黃青霉菌。
?、趯?duì)于產(chǎn)孢子能力不強(qiáng)或孢子發(fā)芽慢的菌種，可以用搖瓶液體培養(yǎng)法。將袍子接入液體培養(yǎng)基的搖瓶中，振蕩培養(yǎng)，獲得菌絲體作為種子。如產(chǎn)鏈霉素的灰色鏈霉菌。
?、蹖?duì)于不產(chǎn)孢子的細(xì)菌，如生產(chǎn)谷氪酸的產(chǎn)生菌，谷氨酸棒桿菌一般采用斜面營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞保藏法，4 ℃冰箱保藏的斜面菌種用固體斜面活化培養(yǎng)后，即呵接入茄子瓶斜面或三角瓶液體培養(yǎng)，此培養(yǎng)物即可作為種子罐的種子。
④酵母菌一般保藏在麥芽汁瓊脂斜面培養(yǎng)基上，于4℃冰箱保藏，擴(kuò)大培養(yǎng)可逐級(jí)擴(kuò)大到10 ml液體試管、250 ml 三角瓶、1000 ml 三角瓶，即可作為100 L麥芽汁種子罐的種子。
固體斜面菌種培養(yǎng)
固體斜面試管培養(yǎng)在無(wú)菌室內(nèi)進(jìn)行，菌種室需經(jīng)常清掃和消毒滅菌，以防止雜菌和噬菌體的污染。生產(chǎn)上使用的斜面菌種一般只移接三次，每次可移接數(shù)支，分別擴(kuò)大培養(yǎng)后使用，不宜多次移種，避免菌種的自然變異引起的菌種不純。因此，菌種的分離純化工作是企業(yè)經(jīng)常性的工作。斜面培養(yǎng)的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件根據(jù)所用生產(chǎn)菌種的不同而異。
固體培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)
固體培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)包括茄子瓶、克氏瓶、培養(yǎng)皿、蘑菇瓶、一三角瓶、瓷盤等培養(yǎng)方式。可以進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)或靜置培養(yǎng)。
搖瓶液體培養(yǎng)
三角瓶放到搖瓶機(jī)或搖床上，振蕩或回旋培養(yǎng)，搖瓶通氣最的大小取決于搖瓶機(jī)型式，轉(zhuǎn)數(shù)、振程（或偏心距）、三角瓶容量、裝料量。搖瓶培養(yǎng)是為了在振蕩過程中溶入較多的氧，以供微生物在生長(zhǎng)繁殖過程中氧的消耗。實(shí)驗(yàn)室階段的培養(yǎng)過程中，因?yàn)榫N和培養(yǎng)物的量較少，可以在無(wú)菌狀態(tài)下直接接入。
本文參考《發(fā)酵工程原理及技術(shù)》一書。
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